多肽合成儀的工作原理是通過固相合成技術(shù),依次進(jìn)行氨基酸的活化、耦合和脫保護(hù)操作,反復(fù)循環(huán)直至形成完整的多肽鏈。該合成儀是生物技術(shù)領(lǐng)域重要的設(shè)備,主要用于合成特定序列的多肽。這一技術(shù)在藥物研發(fā)、生物醫(yī)學(xué)研究等方面有廣泛應(yīng)用。
多肽合成儀的各個(gè)組成部分及其功能:
1.反應(yīng)器:反應(yīng)器是合成儀的核心部分,通常由高壓玻璃管或不銹鋼管制作,具備耐腐蝕、耐高溫的特點(diǎn)。反應(yīng)器內(nèi)固定有固相載體,如樹脂,用于連接第一個(gè)氨基酸。
2.氣體輸送系統(tǒng):該系統(tǒng)主要由氮?dú)夤蕖⒖諝膺^濾器、壓力表和閥門等部分組成。其作用是將氮?dú)廨斔偷椒磻?yīng)器中,以促進(jìn)反應(yīng)進(jìn)行,防止氧氣對反應(yīng)產(chǎn)生不利影響。
3.液體輸送系統(tǒng):液體輸送系統(tǒng)由溶劑罐、溶劑泵和針頭等部分組成,負(fù)責(zé)將各種溶液精確地加入到反應(yīng)器中,以實(shí)現(xiàn)多肽的逐步合成。
4.控制系統(tǒng):控制系統(tǒng)包括計(jì)算機(jī)、溫度傳感器、壓力傳感器和流量計(jì)等,用于精確控制反應(yīng)器的各項(xiàng)參數(shù),確保反應(yīng)順利進(jìn)行。
1.準(zhǔn)備工作:首先將所需的氮?dú)夤藓腿軇┕捱B接到合成儀上,并加入所需的溶劑和氮?dú)狻H缓笤O(shè)置反應(yīng)條件,如溫度、壓力和時(shí)間等參數(shù)。
2.去除保護(hù)基:在固相載體上的第一個(gè)氨基酸通常帶有保護(hù)基,以防止非特異性反應(yīng)。通過加入適當(dāng)?shù)娜軇┖驮噭ㄈ鐗A性溶劑),去除保護(hù)基,暴露出氨基。
3.活化和耦合:去除保護(hù)基后,對氨基進(jìn)行活化,通常是通過加入活化劑和耦合劑來實(shí)現(xiàn)。活化后的氨基與下一個(gè)氨基酸的羧基進(jìn)行耦合,形成肽鍵。
4.反復(fù)循環(huán):上述步驟可以循環(huán)進(jìn)行,每次添加一個(gè)新的氨基酸并保護(hù)已添加的氨基酸,直到形成完整的多肽鏈。
5.脫保護(hù)和純化:完成多肽鏈的合成后,需要脫除所有保護(hù)基,通常使用強(qiáng)堿或酸來實(shí)現(xiàn)。最后,通過色譜技術(shù)如高效液相色譜進(jìn)行純化,確保得到高純度的多肽。